1 合適的細胞培養(yǎng)基
合適的細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一,培養(yǎng)基不僅細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎物質(zhì),而且還培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
2 血清
目前,大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清.血清是細胞培養(yǎng)液中重要的成分之一,含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。
3 無菌無毒細胞培養(yǎng)環(huán)境
無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件.在體外培養(yǎng)的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身代謝物質(zhì)積累,可導致細胞中毒死亡.因此,在體外培養(yǎng)細胞時,必須保持細胞生存環(huán)境無菌無毒,及時**細胞代謝產(chǎn)物。
4 恒定的細胞生長溫度
維持培養(yǎng)細胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度.不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同.人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡.培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復;41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時,細胞全部死亡.相反,溫度不低于0℃時,對細胞代謝雖有影響,但并無傷害作用;把細胞放入25-35℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減慢;放在4℃數(shù)小時后,再回到37℃培養(yǎng),細胞仍能繼續(xù)生長.細胞代謝隨溫度降低而減慢.當溫度降至冰點以下時,細胞可因胞質(zhì)結冰受損而死亡.但是,如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存。
5 合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動物細胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。
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