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蛋白質(zhì)純化方法總結(jié)
分離純化某一特定蛋白質(zhì)的一般程序可以分為前處理、粗分級、細分級三步。

1.前處理：分離純化某種蛋白質(zhì)，首先要把蛋白質(zhì)從原來的組織或細胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來并保持原來的天然狀態(tài)（如果做不到呢？比如蛋白以包涵體形式存在），不丟失生物活性。為此，動物材料應(yīng)先提出結(jié)締組織和脂肪組織，種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免手單寧等物質(zhì)的污染，油料種子好先用低沸點（為什么呢）的有機溶劑如乙醚等脫脂。然后根據(jù)不同的情況，選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，將組織和細胞破碎。動物組織和細胞可用電動搗碎機或勻漿機破碎或用超聲波處理破碎。植物組織和細胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達到目的。**細胞的破碎比較麻煩，因為整個**細胞壁的骨架實際上是一個借共價鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅韌。破碎**細胞壁的常用方法有超聲波破碎，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細胞破碎后，選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來。細胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去。
如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分，如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質(zhì)等，則可利用差速離心的方法將它們分開，收集該細胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質(zhì)細胞器結(jié)合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚，然后用適當(dāng)介質(zhì)提取。

2. 粗分級分離：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液（有時還雜有核酸、多糖之類）獲得后，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⑺牡鞍着c其他雜蛋白分離開來。一般這一步的分離用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大，既能除去大量雜質(zhì)，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮，則可采用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空干燥或其他方法進行濃縮。

3.細分級分離：樣品經(jīng)粗分級分離以后，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳法，包括區(qū)帶電泳、等電點聚焦等作為后的純化步驟。用于細分級分離的方法一般規(guī)模較小，但分辨率很高。

結(jié)晶是蛋白質(zhì)分離純化的后步驟。盡管結(jié)晶過程并不能保證蛋白一定是均一的，但是只有某種蛋白在溶液中數(shù)量上占有優(yōu)勢時才能形成結(jié)晶。結(jié)晶過程本身也伴隨著一定程度的純化，而重結(jié)晶又可除去少量夾雜的蛋白。由于結(jié)晶過程中從未發(fā)現(xiàn)過變性蛋白，因此蛋白的結(jié)晶不僅是純度的一個標(biāo)志，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標(biāo)。

蛋白質(zhì)分離純化的方法：

一、根據(jù)分子大小不同的純化方法
1、透析和超過濾
2、密度梯度離心
3、凝膠過濾

二、利用溶解度差別的純化方法
1、等電點沉淀和pH控制
2、蛋白質(zhì)的鹽析和鹽溶
3、有機溶劑分級分離法
4、溫度對蛋白質(zhì)濃度的影響

三、根據(jù)電荷不同的純化方法
1、電泳
2、聚丙烯酰胺凝膠電泳
3、毛細管電泳
4、等電聚焦
5、層析聚焦
6、離子交換層析

四、利用選擇性吸附的純化方法
1、羥磷石灰層析
2、疏水作用層析

五、利用配體的特異生物學(xué)親和力的純化方法
親和層析（affinity chromatography）：
a.凝集素親和層析
b.**親和層析
c.金屬螯合層析
d.染料配體層析
e.共價層析

六、高效液相層析合快速蛋白質(zhì)液相層析